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吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)測試盒微量法

簡要描述:特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱:吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)測試盒微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣
檢測方法:微量法
產(chǎn)品貨號:BK-01S6526
產(chǎn)品分類:氨基酸代謝系列
商品介紹:
測定意義:
脯是植物體內(nèi)適應逆境脅迫的一種重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。高等植物中脯代謝因其初始底物不同,分為谷( Glu) 和鳥( Orn) 兩條合成途徑。吡咯啉-5-羧酸合成

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時間:2023-12-27
  • 訪  問  量:731

詳細介紹

特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

產(chǎn)品名稱:吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)測試盒微量法

產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣

檢測方法:微量法

產(chǎn)品貨號:BK-01S6526

產(chǎn)品分類:氨基酸代謝系列
商品介紹:

測定意義:

脯是植物體內(nèi)適應逆境脅迫的一種重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。高等植物中脯代謝因其初始底物不同,分為谷( Glu) 和鳥( Orn) 兩條合成途徑。吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS, Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase)是以谷為前體合成脯途徑的關鍵酶,對植物適應逆境脅迫起關鍵作用。

測定原理:

吡咯啉-5-羧酸合成酶催化谷生成P5C過程中分解ATP生成ADP和無機磷,通過鉬酸銨比色法測定單位時間內(nèi)產(chǎn)生無機磷的量可確定P5CS活性。

需自備的儀器和用品:

可見外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

所需的儀器和用品:

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗

樣本和試劑浪費!

1、樣本制備

組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進行提取

 

細菌/細胞樣本:

先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進行提取。 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

QQ截圖20220307153537.png 

實驗方法學:

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

2 ug pYES2-FLAG pYES2-FLAG 低溫運輸,-20℃保存

50次 柱式真菌DNAout Column Fungal DNAOUT 常溫

2 ug pE-SUMO pE-SUMO 低溫運輸,-20℃保存

 cycloheximide 11.25mg/支*5

5g  B6 Vitamin B6 室溫保存

50T 轉基因植物NPTⅡ基因PCR檢測試劑盒  低溫運輸,-20℃保存

48 T 肝/肌糖元測試盒  Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

50ML Magnesium Sulfate Solution(溶液),1M Magnesium Sulfate Solution,1M 常溫保存

50次 T3體外轉錄試劑盒 T3 in vitro Transcription Kit -20℃保存

2 ug pLVX-EF1α-DsRed-Monomer-C1 pLVX-EF1α-DsRed-Monomer-C1 低溫運輸,-20℃保存

測定培養(yǎng)基 Folic Acid Assay Medium 250g

吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)測試盒微量法Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1021)  磷酸化小板源性生因子受體-B抗體 規(guī)格: 0.1ml

HER2 receptor(NT)  HER2受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

CAGE1/CT3/CT95  瘤/睪抗原3抗體 規(guī)格: 0.2ml

SOAT2/ACAT2  ?;D移2抗體 0.2ml

Goat Anti-Bovine IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml

KLHL20  Kelch樣蛋白20抗體 規(guī)格: 0.2ml

GDNF  膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體 規(guī)格: 0.1ml

Apg12  自噬相關蛋白12抗體 規(guī)格: 0.2ml

IL-2  白介素2抗體(人) 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-EGFR (Thr678)  磷酸化表皮生因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit anti-mouse Kappa light chain/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標記的兔抗小鼠k鏈 規(guī)格: 0.1ml

CAS/CSE1  細胞凋亡敏性基因抗體 規(guī)格: 0.1ml 

注意事項:

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?

對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數(shù)。

若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。

 


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